Re: [問題] 請問有關T細胞亞群抗體染色
FACS是最陽春的流式細胞儀
不過如果你是新手，建議你找個人幫你看看所有的設定有沒有問題
我假設你有人可以幫你操作機器，幫你找到細胞群
(有很多新手一開始完全不知道自己到底在看什麼，細胞到底在哪裡)
以下是你需要準備的sample
1. neg ctrl-
最理想的negative control是isotype control
也就是由同一種動物得到的同一類抗體，但是並沒有抗原專一性
主要是測non-specific binding的background
舉例說明，如果你用的抗體是
Rat anti-mouse CD4-FITC, IgG2a kappa chain
它的isotype control就是
Rat anti-mouse IgG2a, Kappa-FITC (BD Pharmigen, Cat No. 554688)
同樣的，你也會需要另外一支 PE-conjugated isotype control
當作 Rat anti-mouse CD25-PE
2. compensation controls
(1) FITC only
(2) PE only
FITC and PE的emmission會overlap,沒有經過校正，
single positive的訊號會被誤讀為double positive
要做這種校正
你需要只染單一顏色的樣本(一管樣本只有一個顏色)
通常我們都會找細胞一定會表現的表面抗原作這種control
譬如說你做的是T細胞
你可以用
(1) CD4-FITC
(2) CD4-PE
這種control不但可以用來做compensation
可以讓你知道你的染色過程有沒有問題
3. 你的real sample
-染上CD4-FITC加CD25-PE
至於怎麼做四象限區分(qua-plot)，下一篇再說好了
我不喜歡念洛洛長的文章
everblue
※ 引述《zamki.bbs@ptt.cc (創造自己的世界)》之銘言：
: 最近要看CD4+CD25+T cell 的表現量
: 一個是染FITC 另一個染PE
: 請問有哪位大大有這種三色螢光染色 ( 流式細胞儀 ）的作法呢 ?
: 因為我們家我算第一個作這種T 細胞亞群, 所以完全不行
: 要是有哪位高手家是用 BD的 FACS
: 也麻煩請您指導一下怎麼使用四象限區分 orz
: 都要畢業了才給我出難題的老闆 ...orz
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◆ From: 67.10.241.33
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