Re: 關於cloning的問題...
※ 引述《realm.bbs@ptt3.cc (realm)》之銘言：
: 我的selectable marker是kanamycin...
: 查閱網路上的一般用量是50ug/ml...
: 也有人說過...kanamycin很強...所以可以減少用量...
: 想請問有經驗的人, 如果增加用量 (如100ug/ml) 是否可能會殺死所有的菌...
: 還是可以提高篩選的成功率??
: 另外, 由於一直clone不到某一基因...(而每一個步驟都蠻確定沒有問題...
: 也都作了各種control)
: 所以懷疑, 該基因對細菌本身可能有毒性...
: 請問, 如果真的是如此, 那該怎麼辦呢?? 是否就沒有機會clone這個基因了??
: PS. 目前使用的strain為DH5alpha
: 先謝過~~:)
1. 我是用25ug/ml，就有效果！ 書上是寫working conc.為30ug/ml
用太高，會把菌真的殺光光！
2. 你是要產蛋白質嗎？ 有考慮此蛋白質是不是對菌本身抑制用作？
若有的話，那要換調控較嚴謹的質體與system！
3. 把質體利用甲基化酵素作"甲基化"保護，可以防止菌把質體給分解！
可以增可轉殖的效率！這是我以前的作法，參考參考！
--
wensing (ptt) = eular (kkcity)
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.23.212
討論串 (同標題文章)
本文引述了以下文章的的內容：
完整討論串 (本文為第 2 之 2 篇)：
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
