Re: [問題] 請問電泳的Dye
看板Biotech (生命科學)作者fjubiology (Science閱讀俱樂部)時間19年前 (2006/07/05 14:52)推噓1(1推 0噓 0→)留言1則, 1人參與討論串2/2 (看更多)
※ 引述《satantaco (TACO)》之銘言：
: 最近有一個問題
: 狀況是這樣的
: 通常跑agarose gel的時候
: sample要先與dye混合然後再load入well裡
: 那譬如我的Dye是6X的
: 也就是sample以5ul而Dye是1ul混合成6X
: 但是有時候sample很珍貴只以2ul做分析
: 會以2ul的sample混合1ul的Dye然後以TAE buffer補滿到6ul
: 或者是2ul的sample混合0.4ul的Dye
: 我的問題在於電泳槽裡的Buffer也是TAE buffer
: 那我能不能以1ul的Dye加上2ul的sample混合後就loading
: 因為電泳槽裡的Buffer應該在加入的同時就會混合了
: 但是這樣我的同學認為這樣一開始的比例就不對
: 所以想問問看板上的大大覺得是否也是一定要補滿到6ul才loading
不一定要補，只要你的loading dye足以讓DNA完全下沉於well底部不會漂浮
其實我的想法很簡單，loading dye是拿作什麼的？
讓DNA完全下沉於well底部不會漂浮
我會這麼想的原因很簡單，agarose gel電泳的結果會讓同樣大小的片段位在同一個
部位(前提是只有一個構形)
DNA的亮度我們都是染EtBr，而DNA的亮度是跟EtBr的插入成正比
也就是說Base越多插入的EtBr越多，DNA的亮度越亮
所以那如果N倍的dye拿來混合小於N體積的DNA的亮度跟你補水或buffer亮度應該是相
同的
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織田信長：「杜鵑不叫，我殺了牠！」
豐臣秀吉：「杜鵑不叫，我想辦法讓牠叫！」
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※ 編輯: fjubiology 來自: 140.136.180.230 (07/05 15:06)
推
07/06 09:41, , 1F
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