Re: [問題] 雷射掃描共軛焦顯微鏡 confocal的樣品前處理?

看板Biotech (生命科學)作者mincake.時間19年前 (2006/10/31 02:00)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《paua.bbs@ptt.cc (waiting for good news)》之銘言： > 哈哈, 不好意思, 問題有點多 :P > 我自己之前做過(chamber slide), 樣品處理都沒什麼問題, 但是這次帶著同學做, > 竟然出現一些奇怪的問題... 麻煩請大家和我一起想想, 謝謝喔 :) > 我知道這應該沒有標準答案, 所以想請大家分享一下經驗 ^^ > 1. 種細胞 > (1) 細胞不易種勻, 如果我在種細胞過後一個小時再pipetting, 可以讓它更均勻嗎 > (2) 當細胞貼附性不佳, 是否可用collagen先coating在slide表面? 你好 , 我也是新手也許你可以參考看看 (1) 一般細胞會在1~3小時內貼附上去 , 如果你又去pipetting他對於已經開始貼上去的細胞是種傷害 , 因此不建議如果你希望均勻一點 , 可以沿著管壁多pipetting幾次(細胞盡量分開比較好) 另外許多器皿的設計底部並不是全平的 , 再加上靠近旁邊會有張力因此液面高度是不一樣的 , 建議medium可以多加一點克服分不不均的問題 (2) 我的做法: 先用鹽酸浸泡玻片(此步功效影響不大) 再用Poly-lysine coated (但因為是自己coated 容易造成分佈不均) 後來我索性不做這些步驟 , 直接小心的把打勻的細胞均勻的滴在玻片上小心不要搖動他(過程中都要小心), 等5min左右在拿去顯微鏡下觀察 > 2. wash > * 實驗室傳下的實驗步驟是: wash 3次, 把chamber slide用PBS灌滿, 再吸走 > * 聽說某實驗強者: 3次, 每次wash 5分鐘 > --> 到底哪種可以洗得比較乾淨? > 3. 2抗有雜質要怎麼辦? > 我同學的二抗是anti-goat的FITC, 在顯微鏡下看起來有好多雜質(特亮的點, 也不是 > 細胞的型態), 不曉得是不是一定要買新的抗體才能解決? 另外, 是否可離心將雜質 > 離下來呢? (但是雜質好小耶, 比細胞還小, 離的下來嗎). > 話說我家實驗室的二抗是anti-mouse的FITC最近聽學姊和助理說, 好像壞掉了 > (會亂bind <-- 這要怎麼看啊?), 而且好像有雜質. 據說這是好幾年前(>3-4yr)買的, > 但是我用都沒有問題, 不曉得到底是為什麼啊? > 所以我才會想說我同學的樣品出現雜質, 是不是也可以避免的呢? 多wash幾次有用嗎? -- 夫兵者不祥之器物或惡之故有道者不處君子居則貴左用兵則貴右兵者不祥之器非君子之器不得已而用之恬淡為上勝而不美而美之者是樂殺人夫樂殺人者則不可得志於天下矣吉事尚左凶事尚右偏將軍居左上將軍居右言以喪禮處之殺人之眾以哀悲泣之戰勝以喪禮處之道常無名樸雖小天下莫能臣侯王若能守之萬物將自賓天地相合以降甘露民莫之令而自均始制有名名亦既有夫亦將知止知止可以不殆譬道 n175139.nhri.org.tw海