[問題] 雷射掃描共軛焦顯微鏡 confocal的樣品前處理?
看板Biotech (生命科學)作者paua (waiting for good news)時間19年前 (2006/10/27 02:26)推噓5(5推 0噓 1→)留言6則, 4人參與討論串1/2 (看更多)
哈哈, 不好意思, 問題有點多 :P
我自己之前做過(chamber slide), 樣品處理都沒什麼問題, 但是這次帶著同學做,
竟然出現一些奇怪的問題... 麻煩請大家和我一起想想, 謝謝喔 :)
我知道這應該沒有標準答案, 所以想請大家分享一下經驗 ^^
1. 種細胞
(1) 細胞不易種勻, 如果我在種細胞過後一個小時再pipetting, 可以讓它更均勻嗎
(2) 當細胞貼附性不佳, 是否可用collagen先coating在slide表面?
2. wash
* 實驗室傳下的實驗步驟是: wash 3次, 把chamber slide用PBS灌滿, 再吸走
* 聽說某實驗強者: 3次, 每次wash 5分鐘
--> 到底哪種可以洗得比較乾淨?
3. 2抗有雜質要怎麼辦?
我同學的二抗是anti-goat的FITC, 在顯微鏡下看起來有好多雜質(特亮的點, 也不是
細胞的型態), 不曉得是不是一定要買新的抗體才能解決? 另外, 是否可離心將雜質
離下來呢? (但是雜質好小耶, 比細胞還小, 離的下來嗎).
話說我家實驗室的二抗是anti-mouse的FITC最近聽學姊和助理說, 好像壞掉了
(會亂bind <-- 這要怎麼看啊?), 而且好像有雜質. 據說這是好幾年前(>3-4yr)買的,
但是我用都沒有問題, 不曉得到底是為什麼啊?
所以我才會想說我同學的樣品出現雜質, 是不是也可以避免的呢? 多wash幾次有用嗎?
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