Re: [問題] Western Blot
: 第一個問題....你的percentage為何可以差這麼多7% v.s 12%?
: 還有transfer 的電流？如果gel大小一樣為何要減半？
第一次都用12%膠來跑 然後看到自己要看的分子感覺被擠在上面
加上下方的background多 所以考慮用低濃度的跑~
第一次 我是跑兩個膠 第二次只跑一個 所以電流就減半囉~
: 二抗太高只會壓海苔....你的沒signal band不必考慮降低二抗！
嗯嗯
: : TBST VS PBST
: 這個問題有深度.....當初也困擾我很久......
: 我問過很多做Western好的lab同學....其實他們也不知道
: 怎回答這問題...TBST tris-base saline buffer加 tween 20
: 而PBST是phosphate-base buffer saline加 triton x-100
: 我當年是搞不清楚tween 20 和Triton X-100有何不同？
: 經過這幾年....我的結論是....黑貓花貓白貓....會抓老鼠就是好貓
: 一個大原則是做磷酸化抗體別用PBST....其他都是實徵理由...
: 如果有錯希望高手指導....所以建議你自己做個實驗PBST TBST
: side by side跑一次.....證實看看是不是PBST才行？
呵呵 後來發現TBST也可以 是公用二抗壞掉了
謝謝你哩
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