Re: [問題] 有關protein expression vector (pET s …
※ 引述《lentivirus ()》之銘言:
: 大家好...
: 最近在做cloning的時候不是很順...
: vector:pET-21b
: 好不容易ligation-transformation後長出colony
: 但是搖5ml菌液抽plasmid結果確是空的...
: 不知道大家有沒有類似的經驗....
: 有可能是大部分的能量都拿去做蛋白了...質體複製的少...
: 不過我有去測濃度...每ul還有20ng...這就蠻怪的...
: 想請教大家..在做這些蛋白表現的construction有什麼要特別注意的...
: 謝謝大家囉 ^_^
可能長出來的colony都是雜菌吧....
抗生素濃度不夠或是培養時間過長,都會讓你的plate上長出雜菌
建議你可以準備兩個plate,一個塗沒有transform的comp. cell
另一個才是塗有transform的菌,這樣比較能知道所長出來的是不是雜菌
至於你說的測濃度有DNA...有可能是你抽DNA的時候contaminant到細菌的
genomic DNA.
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.96.172
推
12/05 19:57, , 1F
12/05 19:57, 1F
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