Re: [問題] 請問First-strand跟One-step 兩個PCR系統的差別
※ 引述《lifeknockdow.bbs@ptt.cc (黑點)》之銘言：
> 我好像有點被搞混了，能請問一下cDNA amplify的過程
> 中這兩種kit的差別在哪？
> 1) First-Strand Synthesis
> 2)One-Step RT-PCR System
> 是我的誤解嗎？我會以為這兩種系統的差異是在
> 第一個他是針對total RNA來amplify全長的cDNA出來。
> 而第二個系統是針對，特異性的片段來amplify。
> 能否請知道的大大解釋一下！！謝謝
就我所知道的回答看看,有錯誤請指證
我想你應該指的是RT-PCR two steps 跟one step的差異吧?
Two steps 基本上跟你說差不多,是針對Total RNA amplify cDNA
所以是使用Oligo-dT當作primer,再利用reverse transcriptase反轉錄成cDNA
amplify出來的是total cDNA,然後再用這cDNA,
以specific primer去PCR amplify所要的片段
One step 只是將reverse transcriptase 和 taq mix在一起的混合
所以直接以specific的primer加入,先以低溫作reverse transcription,
再以高溫作PCR amplification, 祇是一開始就是以specific的primer作cDNA而已
應該差不多是這樣吧
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◣◢ Author: zoarlu 從 140.109.56.171 發表
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