[問題] 有關cloning的問題
我想要clone 人類chromosome上的某個基因,
之後要接到retroviral的vector上,
請問,有辦法直接用設計兩端primer方式,夾出這個基因嗎?
(之前做細菌某基因的clone會用這個方法,不曉得是否可用在人類chromosome上?)
還是,要用取出RNA做RT PCR 方式做出cDNA,再去接vector?
另外,假設預計要用的vector是pSIR,
若我想把上面的promoter換成另一個,要怎麼換?
可以直接用restriction enzyme切下原本promoter區域,
然後ligase欲換的promoter上去嗎?
這樣,是不是還要確認nucleotide base數目是否有shift?
第一次做這方面,請問大家,
我這樣的實驗設計對不對,有沒有錯誤需要修改或需要注意的事項?
謝謝~
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