Re: [問題] 5'RACE
※ 引述《MPGTR (GOOD)》之銘言：
: 請問有人在做5'RACE嗎
: 我是要做出full length
: 但是我很難拉到最長的那一條mRNA,也就是+1拉
: 我做都有band,
: 而且我有DNA的Seq, 所以我用DNA上的foward primer去看是否有更長的
: 事實證明有, 但我5'RACE的band卻不是那麼長
: 有沒有可以解決的方法,
: 我是用termial transferase接上dT的方法
: 難道要挑clone挑到死也沒有結果的埋頭苦幹嗎
: 請高手幫我解答一下
: 謝謝!!
呃, 不好意思, 不太懂都有band是怎樣的band?
是指 RT 的check嗎?
DNA的seq 是指 genomic DNA嗎?
那不就可以預期 5'RACE應該獲得的片段長度了?
我是覺得 genomic DNA的PCR就算比較長,
應該也不代表mRNA就會到那麼長吧?
不過以我們實驗室利用terminal transferase做 RACE的話
會先確定 RNA 抽得好不好
(run gel check外, 還會用靠近5'端的 forward及reverse primer去check)
在進行terminal transferase reaction前,也會先濃縮 RT product
不知道會不會有所幫助.........
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◆ From: 140.112.80.54
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