[問題] 關於檢測突變的方法
這兩天唸一篇paper，是要看cancer cell mitochondrial DNA突變
(ND4 mutation in transitional cell carcinoma: Does mitochondrial mutation
occur before tumorigenesis? C.Y. Tzen,Mitochondrion,2007,273-278)
作者用了三種方法來檢查：
DNA sequencing
RFLP
DHPLC(denaturing HPLC)
而文中提到，三種方法的sensitivity是定序最低，RFLP其次，DHPLC最高
我想，sensitivity是指只需少量sample就能有結果吧
a.但如果在知道mtDNA序列的情況下，用PCR放大不就沒有sensitivity高低的疑慮
還有，既然要找突變，那檢查的正確性應該比較重要
我以為定序應該最正確，因為兩個序列一對馬上就知道哪裡突變了
b.問了朋友，說定序很容易出錯，但他也不會解釋，請問是為什麼呢?
然後這個朋友一直跟我說，和定序相比，RFLP就可靠多了
c.但我覺得，要是突變不是發生在切位上的話根本就檢查不出來阿，怎麼會比較正確?
三種方法都只是學過原理，並沒有實際操作過的經驗
以上共三個問題，麻煩懂的人解答了，謝謝!...
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