Re: [問題] extraction用urea產生的cyanate問題
> 我的protein在經E. coli表現後
> 破菌、離心後發現是位於inclusion body
> 為了之後跑膠的方便，我用8M urea不用guanidine HCl作extraction
> 卻發現protein由原來的兩條band (之前測，未破菌以western測得)
> 變成了連續由約10KDa一直延伸到gel最上面的100多KDa 的 數十條bands
> 請問這有可能是urea形成cyanate造成的嗎
Protein carbamylation很難避免
但是畢竟還是少部份
(你有很大量的蛋白質 只有很少量的isocyanate)
所以我覺得機會不大
建議你先確定 這些條帶都是你的蛋白質
而不是污染物
必要時 配urea溶液時不要加熱 或調到微酸
甚至用離子交換樹脂
都可以減少isocyanate
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※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: 61-59-139-151.adsl.static.seed.net.tw
推
06/18 19:35, , 1F
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