Re: [問題] 請大家救我的real time PCR...
※ 引述《aggaci (I tried....)》之銘言：
: ※ 引述《kyokolove (心想事成)》之銘言：
: : 我最近做real time PCR
: : 當初這個基因我已經用RT-PCR 做過了
: : 想說用real time能更準確比較
: : 結果 我卻跑不出結果 每次都是undetect
: : 我一共用了兩種primer 一種是用primer3設計
: : 一種是RTprimerDB這個網站提供的
: : 可是兩個網站都呈現出一樣的結果--> undetect
: : 而且他們的曲線長的很奇怪
: : 都是在threshold以下 一直呈現鋸齒狀而有向上的趨勢
: : 可是一直到40個cycle前都沒有衝過threshold
: : 可是我的internal control GAPDH跑的很正常
: : 所以排除機器或是材料的問題...
: : 再說正常的曲線應該是會突然有暴衝幾乎直線通過threshold的感覺巴
: : 請問有人有這種經驗嗎 這樣的 曲線 undetect 代表什麼情況呢???
: : 請大家幫幫我~~~~~~~ 我已經重做快兩個月了 Q ____ Q
: : 謝謝大家~~
: 是否有把QPCR玩的產物拿去跑電泳？
: 你的產物預期多大？
: 這很明顯應該是沒擴增出來...
其實我也有一個問題
就是我的real time pcr做的沒有再現性
就算同一批sample做兩次可能差異都不少
到底技巧在那裡呢
RNA ratio不夠高會不會有關係
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