[問題] EMSA
最近剛開始做EMSA的實驗
發現loading的sample 似乎都跑不下來 訊號大多在well 底部
以下是我的實驗條件
4% nondenature PAGE (37.5:1, acryl:bis) 1XTBE
loading sample: NE + isotope labeled probe(38bp) + poly dIdC
+ salmon DNA + buffer C
hot probe count: 28萬cpm/ul
NE: 6.7ug/ul
Lane1 是 不加NE 只有free probe
其他Lane 是分別做 固定NE 或 hot probe 作 titration (total 13ul)
loading 前有wash well 也有pre run 30min 200V , run gel 是200V 1小時10分
壓片的結果 有看到底部有free probe
但是lane 1 (No NE) 與其他lane 在well 底部都有很強的訊號
lane 1 的訊號是有比其他lane 弱
是否有可能是protein complex 太大 跑不下來 或是有其他的因素使protein
沉澱在well底部
麻煩有做過EMSA的前輩能給予改善的意見
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
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