Re: [求救] PCR,以前做的出來,現在做不出來了?
謝謝大家給的意見,
沒想到有這麼多人願意提供建議,真感動耶~
不過我還是做不出來Orz
目前的進度是:
我今天換了不同位置的primer
結果依然還是沒有產物(dNTP也拿了一支全新的,Taq及buffer同時試兩個不同牌子)
實驗室的學長幫我試過原先的primer
改過條件,也是不行
(之前忘了說,舊primer跑不出來後,我有重新合成一支新的)
總不能睜眼說瞎話,"我沒有陽性菌株>.<"
明明之前曾經定序是ok的呀Q_Q
現在的想法是,應該是抽DNA出了問題吧,
只是想破頭都搞不清楚...
用Kit抽也還是跑不出來...
我想還是請個道士來實驗室做個法好了Orz
※ 引述《yumei (愛自己最重要)》之銘言：
: 請教版上的PCR高手們,
: 我目前做的題目是關於細菌的基因,
: 我做的是陰性菌,目前在檢測細菌中是否帶有特定的基因,
: 這個實驗在今年二月做過一部份,結果良好,一切都沒問題,
: 因為之後收到更多的菌株,因此在九月時又重新進行此實驗
: 結果非常慘,再也跑不出來了!
: 連之前二月做的陽性菌株,現在也無法跑出我要的產物
: 原先懷疑是PCR的問題
: 所以目前試過3家dNTP,4家Taq,
: 調整過鎂離子濃渡由1.5mM試到2.5mM,結果連水都出現偽陽性
: 改變annealing的溫度下降2-4度
: 都無法再度amplify出正確產物,
: 後來又懷疑是否DNA有問題,
: 又重抽DNA兩三次
: (使用過phenol/chloroform/Isoamyl Alcohol的方法也試了用kit抽DNA)
: 還是沒辦法Orz
: 目前還沒試的,只剩下加DMSO了
: (等會就知道結果了T_T)
: 可是我二月時不加DMSO也可以跑出來呀~~~
: 有人可以再給我不同的建議嗎?
: 試了快兩個月了,再做不出來,我真的可以不用玩了Q_Q
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