Re: [求救] 有關HEK293 transfect的實驗.....

看板Biotech (生命科學)作者grandia (香蕉S大王)時間18年前 (2007/11/15 22:05)推噓2(2推 0噓 1→)

留言3則, 2人參與討論串2/2 (看更多)

※ 引述《JinMinHo0626 (想念我的單眼皮男孩~敏湖)》之銘言： : 我最近用Hek293細胞做實驗 : 這株細胞是不是本身就很敏感? : 非常容易飄起來.... : 今天我seeding 4x10的5次方在6well盤中 : 用2ug DNA:5ul lipo做 : 剛剛4小時去看....大部分都飄起來了 : 現在頭很痛~~~~ : 這株細胞transfect方面是不是有些需注意的地方？ : 例如細胞數量...lipo的使用...後續的方法 : 不知道哪位可以大約幫我解惑 : 謝謝@_@ HEK293本來就不會貼的很緊提供一下我們家的方法 293 在 6 well中的transfection 我們大約都會讓293長到8成滿所以你可以先試試看seeding不同量的細胞數然後到隔天用顯微鏡看一下找到一個差不多的以後有可以固定用那個數目去seeding (算細胞很主觀每個人算起來都會不一樣!) 按照lipo的步驟先把medium換成沒有抗生素的2ml(沒記錯的話!) 然後plasmid:lipo大約是1:2就可以往我們都給它4ug plasmid: 8ul lipo (沒記錯的話 6 well condition中 lipo的handbook說可以最多送到4ug DNA) 後面你應該都會作我們家都是收24 hr 就可以看到protein expression 如果要48小時收那細胞量一開始就再低一些免得48小時候就長滿其實用lipo很方便只是最好先把lipo的產品說明看過按照它的指示多少體積下加多少量等等也可以自己嘗試抓condition 當然不同細胞也會有不同的條件這種東西只能給你一個經驗談實驗不都是一直在試條件急不得... 如果你需要的protein不多那當然可以改在12 well作畢竟lipo也不便宜細胞對lipo本來就有不同的敏感度像是HeLa 就很容易死掉所以在同樣6 well下的條件我們plasmid:lipo就會降到1:1 而293和HeLa都算好transfect的細胞用lipo操作效率都可以很高的另外要注意的是~ 293很容易因為你在換medium或是加東西時你去沖到它它就會飄起來所以只要小心操作從well邊緣加進去就好小弟在這賣醜了~ 希望對你有幫助加油啦! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.129.62.51