Re: [求救] 我的western><~~~~~~~~

看板Biotech (生命科學)作者babyfinerain (心香水)時間18年前 (2007/11/21 13:38)推噓0(0推 0噓 0→)

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是小片的page 但是我之前都是加完ECL拿起來放到片夾中約15分鐘路程去壓片都很OK阿不過我昨天換別的ECL band還是沒壓出來可是在膜上真的出現黃黃的band ><~~真的不曉得到底是怎樣為什麼band都出現在不該出現的地方><???? ※ 引述《dorphilvet ( )》之銘言： : 請問你是跑大片的嗎?用到60ug/well : 如果是小片的page，可能量太多了 : 而且我也覺得是ecl你加太久了 : 我也是用二三分鐘就去壓片了 : 不然ecl一下就眊光了 : 不然就是你的一抗可能壞了(可能沒分裝或反覆冷凍解凍之類的) : 你實驗室的人做的出來嗎? : 還是只有你的沒做出來? : 二抗太濃的話，你只會壓出黑壓壓的一片，不會都是空白片 : 你的二抗是怎麼保存的呢?如果是空白片，您可能二抗反而要加濃一點吧 : 還有你的顯影劑，是不是新鮮的，還是都是黑的了? : 您是手洗還是用洗片機洗呀? : ※ 引述《babyfinerain (心香水)》之銘言： : : 小妹的western已經一個月了.... : : 押出來全部都是空白片@@..... : : 後來受不了了>< : : 這禮拜把啥都試了.... : : 60 ug sanple : : 膜上有蛋白~所以transfer沒問題 : : 以一抗 actin 為例 overnight 4度 : : 二抗 anti-mouse IgG 1:5000 2~3小時 : : 柏森的ECL 加了之後約15分鐘路程...壓片---> 空白 : : 今天把ECL拿到暗房加 : : 發現...是有band的.... : : 加了ECL後...有很亮的band...但是過一下下就不見了 : : 壓片時也只有弱到快不見的的痕跡 : : 為啥會這樣呢???? : : 這和我之前的條件都一樣..但是之前壓出來的片很漂亮 : : 自從某次之後都在也壓不出來了...全都是很乾淨的空白片 : : 參考板上說的...是不是2抗太濃?? : : 但是之前作也是1:5000也很OK阿 : : 請問各位先進~~~還有什麼原因呢??? : : 之前用一樣的條件都是在實驗室加完ECL後去壓片 : : 因為等電梯所以約30分鐘 : : 但壓出來還是很漂亮阿 : : 而且都還是用弘晉ECL : : 但是最近是怎麼都做不出來.... : : 我已經到了疑心疑鬼的地步了><~~~ : : 嗚~~~哪位好心人可以告訴我到底為什麼><~~~~~~~~~ : : 上帝一定會非常保佑您的><~~~~~~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.15.161.239