[求救] Plasmid抽出來以後 不久後卻消失了？
小弟最近在進行cloning
養完菌以後 作plasmid extraction
第一次
把抽出來的plasmid直接跑膠發現band很亮 濃度應該OK
接著把抽出來的plasmid切一刀
與空vector及之前insert正確size片段但有點突變的plasmid也切一刀之後比對大小
發現size也正確
接下來的應該就是送去定序
但是到定序商手上 他們測完OD發現我送的sample濃度太低
幾乎跟水沒兩樣
我想說那就再養一次再抽一次吧
第二次
我一樣先跑膠
band很亮
隔天測OD稀釋20倍得到的值卻只有0.0162 也就是說原始濃度只有 0.0162 μg/μl
(老實說這樣的值根本不可能出現前一天那麼亮的band)
不過我想應該定序商的機器還是可以讀得到
再隔一天
定序商來電 一樣 又是sample濃度太低
我發現我的plasmid濃度好像會衰退
不知道實驗經驗豐富的各位可以幫我想想為什麼有這樣的狀況發生嗎？
感謝感謝
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抱怨....
本身不是分生背景 碩一也不是作這方面的題目
因為老闆要被fire才換老闆換題目
現在碩二了 實驗進度龜慢 又一直卡到陰
不是跟Novagen這種大公司買vector結果送來的一管空的eppendorf
裡面什麼都沒有(一隻八千的eppendorf是鑲金的嗎？)
就是買到有問題的plasmid extraction kit
column一直破 結果才承認QC有問題 送一堆新的column補償
現在又遇到plasmid被鬼摸走的狀況
T＿T
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