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Re: [求救] Nickel beads可以拿來做Co-IP嗎?

看板Biotech (生命科學)作者時間18年前 (2008/02/21 02:55), 編輯推噓5(5推 0噓 9→)
留言14則, 3人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
建議用 protein A/G beads coat anti-his-tag antibody -- 莫非定律: 到了期末才會想起期初曾選了一門課卻一直沒去上 補充定律: 拿到成績單才發現上了一學期的課忘了去考期末考 -- ※ Origin: 生命科學 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw> ◆ From: boblu.STUDENT.CWRU.Edu
推
02/21 12:24, , 1F
我有想過 但是target protein的size和IgG太相近
02/21 12:24, 1F
→
02/21 12:25, , 2F
作western壓片的時候 target protein的band會被IgG的訊號
02/21 12:25, 2F
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02/21 12:26, , 3F
蓋掉 所以才想用Ni-beads
02/21 12:26, 3F
推
02/21 23:03, , 4F
IP-western 不是這樣做的好嘛...
02/21 23:03, 4F
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02/21 23:04, , 5F
先用M抗his抗體作IP 然後用R抗his抗體作western
02/21 23:04, 5F
→
02/21 23:04, , 6F
最後用G抗R-Ig抗體作二抗啊
02/21 23:04, 6F
推
02/22 03:48, , 7F
六百嚴肅了,其實h只要把標題改成用Ni-beads做pull-down即可
02/22 03:48, 7F
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02/22 03:50, , 8F
不過要小心容易trapping以及要挑選適合這個方式的control
02/22 03:50, 8F
推
02/22 11:29, , 9F
我知道可以用不童species的抗體來做就不會有我說的現象
02/22 11:29, 9F
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02/22 11:30, , 10F
只是實驗室剛好沒有其他species的抗體 所以才想說用現成的
02/22 11:30, 10F
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02/22 11:30, , 11F
東西來做 boblu兄別生氣啊~
02/22 11:30, 11F
推
02/23 00:16, , 12F
我沒有反對用Ni-bead啦. pull-down 原po文裡有啦
02/23 00:16, 12F
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02/23 00:17, , 13F
我只是說如果要用抗體抓 那 western 的時候就要用不同物種
02/23 00:17, 13F
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02/23 00:18, , 14F
叫你們老闆買嘛 抗his的抗體好便宜的 有時廠商還拿來當贈品
02/23 00:18, 14F
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