Re: [求救] 有關IEF loading的問題

看板Biotech (生命科學)作者NTULSTC (TechComm)時間18年前 (2008/03/01 02:45)推噓0(0推 0噓 0→)

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根據 Amersham 官方 2-D Electrophoresis Handbook 上的說法: (免費的 PDF 檔,建議您去下載 http://tinyurl.com/37cvtl) 各種長度的 strip holder 的 loading sample 量如下 (p.59) 7cm-125uL;11cm-200uL;13cm-250uL;18cm-340uL;24cm-450uL loading sample 後還要加入"適量的" Cover Fluid, 以防止 sample 乾掉與 urea 結晶析出, 至於適量是多少? Handbook 僅很籠統的說 (p.61) "adding fluid until the entire gel is covered" 也就是蓋過 strip 就好, 實務上,我們 7cm holder 加 0.4~0.5mL 您遇到的"sample 似乎會漏超出電極外"的問題, 主要應該是因為蓋上 holder 的蓋子後,Cover Fluid 因毛細現象滲出, 其主成分為礦物油,會浮於 sample 上, 因此您擔心的"loading的量不準"應該不至於. 不過如果漏的太嚴重, 輕者因無法達設定的電壓而嚴重影響焦集效果, 中者於會在黃金面板留下清不掉的焦痕, 重者很可能會短路而使電路板燒毀... 預防方法: 1.7cm holder 加 Cover Fluid 不要超過 0.5mL 2.操作要保持 holder 水平, 溢出 Cover Fluid 要盡量擦掉 3.若貴單位是 Ettan IPGphor III, holder 可以試著不要加蓋子 4.以長久使用的 holder,請送檢修,我們曾發現會從電極漏的... (官方說法 holder 應該很耐用... "Strip Holders may be baked, boiled, or autoclaved. DO NOT EXPOSE THEM TO STRONG ACIDS OR BASES,INCLUDING ALKALINE DETERGENTS."(p.60), 正常使用照理說不應該如此,如果發現與我們一樣的請自行與代理商反應...) ※ 引述《slash7788 (800公里的，答案)》之銘言： : 最近在跑amersham 7cm strip : 用的機器是 Ettan IPGpghor Holder : 方法是將sample 250ul 直接loading在holder上 : 然候設低電壓直接rehydration : 感覺遇到的問題是 sample似乎會漏超出電極外 : 這樣不就代表說我loading的量不準了 : 大家遇到這種問題是怎麼解決的??? : 另外看strip上面的介紹是當load大量的時候會放paper在電極上 : 不過看上面的介紹好像是把paper 固定在電極的一端 : 這樣的話是讓paper 只擋一端嗎(那另一端不就也會照漏了) : 之前我用bio-rad 的系統是兩端都會上濾紙片濾紙片會有bridge的功能 : 但是現在amersham的機器讓我覺得一整個囧阿 : 有在跑amersham的可以幫忙回答一下嗎感恩 -- TechComm 是台大生科院科技共同空間的簡稱，對校內單位提供生物科學相關實體技術與虛擬諮詢之整合服務，目前建制基因體蛋白質體抗體生物影像貴儀等五大平台, 各服務已陸續開動,歡迎您的加入與指正! http://techcomm.lifescience.ntu.edu.tw/ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.5.56 ※ 編輯: NTULSTC 來自: 140.112.5.56 (03/01 02:48)