[求救] 定序問題求救~~~~

看板Biotech (生命科學)作者 (或許天堂也常日落)時間18年前 (2008/03/11 22:20), 編輯推噓8(808)
留言16則, 9人參與, 最新討論串1/4 (看更多)
最近忙著定序的工作 我們實驗室的習慣是,先PCR後跑電泳,再切下band送定序 但不知道為什麼,電泳圖明明顯示清楚的條帶,我也保證切膠的過程與保存沒有問題 但源資(定序公司)竟然送來的資料是全軍覆沒....讓我沒法接受 打電話去公司說請我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大 (總共有39管) 實在很不好意思拿著定序服務失敗的收據單給老闆簽名啊!!!! 所以想請問大家...電泳圖能拍得出來並切下該條帶的膠送定序沒法定序的情況是 有可能發生的嗎??? 另外想請問大家都是給哪一家定序的呢? 明欣的風評如何呢?如果可以也順便給我報個價~~~謝謝~ -- 遺憾提醒我們曾經幸福的可能 但 我們畢竟是錯過了! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 203.187.34.118

03/11 22:26, , 1F
你們沒ligation之後那些步驟嗎~~~
03/11 22:26, 1F

03/11 22:27, , 2F
我之前也像你們一樣直接從gel上切下band~再純化送定序!
03/11 22:27, 2F

03/11 22:28, , 3F
但出來的結果大多是雜訊太多....之後我都乖乖的做ligation
03/11 22:28, 3F

03/11 22:28, , 4F
源資算挺不錯的公司了 比明欣好 怎麼不拿還在管子裡面的產物
03/11 22:28, 4F

03/11 22:29, , 5F
送定序呢? 你是把所有產物都load進去了嗎 用管子裡的會好點
03/11 22:29, 5F

03/11 22:36, , 6F
不直接送PCR產物是因為還可透過電泳圖來確定有沒有BA
03/11 22:36, 6F

03/11 22:37, , 7F
band,會比較保險,而且之前做都沒出錯過,這次卻怪怪的
03/11 22:37, 7F

03/11 22:54, , 8F
確認有沒有用該不用放很多產物去跑吧??
03/11 22:54, 8F

03/11 23:26, , 9F
我送都是附上電泳圖證明single band 回來就很漂亮了
03/11 23:26, 9F

03/11 23:26, , 10F
除非你有double band 不然現在的生技公司似乎都收液態產物
03/11 23:26, 10F

03/11 23:55, , 11F
可以給 PCR products
03/11 23:55, 11F

03/12 00:06, , 12F
我是Single band啊~且跟旁邊的marker比一樣清楚呢!
03/12 00:06, 12F

03/12 00:08, , 13F
所以我才會有點迷惑啊!不過很謝謝大家的意見
03/12 00:08, 13F

03/12 01:01, , 14F
確定primer沒問題?
03/12 01:01, 14F

03/12 01:39, , 15F
PCR時有沒有用含有dye的buffer,有的話定序會有雜訊
03/12 01:39, 15F

03/14 01:22, , 16F
gel extraction loss量太大嗎 ? 我家的大約回收40%~50%
03/14 01:22, 16F
文章代碼(AID): #17rfKhk0 (Biotech)
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