[求救] real time PCR variation 很大(同sample)

看板Biotech (生命科學)作者 (good job)時間18年前 (2008/03/19 12:14), 編輯推噓4(401)
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最近作real time遇到困難 我的問題是這樣 1.primer + mixture 也有大約20~30 cycle, 我懷疑污染 就去跑膠 run gel發現有加cDNA的有兩條BAND, 一條在100bp 是我的產物 另一條在約50bp 我懷疑是primer dimer. 如果不加cDNA 就沒有100bp那條 只有50bp 現在不知道要怎辦 只能redesign primer嗎? 如下圖 M cDNA+primer primer only 一 一 一 一 一 一 一 一 一 2.我的variation非常大 大概會有3~5個cycle(同一個sample) 不知道是不是就是primer dimer造成的. 現在一頭霧水 請教大家 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 76.182.57.0 ※ 編輯: apoptosis 來自: 76.182.57.0 (03/19 12:14)

03/19 12:44, , 1F
primer序列可否PO 一下
03/19 12:44, 1F

03/19 13:35, , 2F
primer dimer應該是一團霧霧的吧@@~~你50bp的band很清楚?
03/19 13:35, 2F

03/19 13:41, , 3F
melting curve如何?
03/19 13:41, 3F

03/19 18:13, , 4F
PRIMER濃度降低試看看
03/19 18:13, 4F

03/19 18:14, , 5F
亮外...是哪一家的機型呢??
03/19 18:14, 5F
文章代碼(AID): #17u9CIuC (Biotech)
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