[求救] DNA總是切不好
我目前在做 Southern Blot 已經卡很久了
跟實驗室其他人用一樣的產品跟Buffer但很常沒成功
通常都是背景值過深 所以無法看出對比
但是我洗片的流程都有按照protocol再延長一倍的時間
前陣子好不容易做出來
但最近要做repeat data又發現DNA切不好
我用的酵素是EcoR1與BamH1分別對我的DNA做裁切
用的DNA濃度是20ng
之前用這樣的量切Kpn1+Bgl2都切的很好
但切單一酵素時大多數的DNA跑電泳後都累積在上面沒有切開
就算我減少DNA的量還是一樣= ="
我的切法是取20ng的DNA先用1.5 micro liter的酵素切3小時
3小時後再補1.5 micro liter 的酵素切 O/N
請問有什麼方法可以讓我的DNA切的比較好?
另外有減少Southern背景值的方法嗎?
我用的hybridazation temp.是60度C
非常的感謝版上大大的幫忙
謝謝
--
在大海中泅泳的魚
你會不會也想要像飛鳥一樣翱翔
還是心甘情願的待在你的 水藍色天堂
--
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