Re: [求救] mutant-enriched PCR 文章問題
※ 引述《linker0726 (哀..煩阿)》之銘言：
: http://clincancerres.aacrjournals.org/cgi/content/full/12/1/43
: 我看了這篇文章
: 有一個地方很不解
: 就是他Fig. 2跑Gel時確認時，本來WT的不是已經用限制酶切過了(配合Fig. 1)
: 應該是會斷成好幾個片段(應該是兩個)
: 為什麼到這邊就變原來的一段了呢~?
: 註:WT分別是A圖的138bp和B圖的130bp
: 感謝
首先我在對全部基因的seq時發現一件事情
paper上的enon跟NCBI genebank不同剛好跳一下
在 paper 在 NCBI
exon19 等於 EXON21
exon21 等於 EXON23
這是一件粉神奇的事情
一開始我以為是isoform
但是剛剛再卻確認一次(不過有可能我太累了 有高手幫指正)
還是一樣
再來你的疑問
這不困難重點在他的primer設計
NC_000007.這是基因的代號NCBI的
EXON 21
ATCCCAGAAGGTGAGAAAG(aTAA)AATTCccgtcgctatcaaggaattaagagaagcaacatctccgaaagccaaca
aggaaatcctcgatgtgagtttctgctttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcagg
EXON23
cagccaggaacgtactggtgaaaacacCGCAGCATGTCAAGATCACAGATtttgggc(tggcca)aactgctgggtgc
ggaagagaaagaataccatgcagaaggaggcaaagtaaggaggtggctttaggtcagcc
AGCATTTTCCTGACACCAGGGA
大寫部分是primer
()部分是限制每
他對限制脢改變所以pcr結果會出現圖2
至於圖1陷阱需要看實驗方法才能董
這你就自己讀一下囉
呵呵加油
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