Re: [求救] mutant-enriched PCR 文章問題

看板Biotech (生命科學)作者albertwang (會思考的魚)時間18年前 (2008/05/17 12:17)推噓0(0推 0噓 0→)

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※ 引述《linker0726 (哀..煩阿)》之銘言： : ※ 引述《albertwang (會思考的魚)》之銘言： : : 首先我在對全部基因的seq時發現一件事情 : : paper上的enon跟NCBI genebank不同剛好跳一下 : : 在 paper 在 NCBI : : exon19 等於 EXON21 : : exon21 等於 EXON23 : : 這是一件粉神奇的事情 : : 一開始我以為是isoform : : 但是剛剛再卻確認一次(不過有可能我太累了有高手幫指正) : : 還是一樣 : : 再來你的疑問 : : 這不困難重點在他的primer設計 : : NC_000007.這是基因的代號NCBI的 : : EXON 21 : : ATCCCAGAAGGTGAGAAAG(aTAA)AATTCccgtcgctatcaaggaattaagagaagcaacatctccgaaagccaaca : : aggaaatcctcgatgtgagtttctgctttgctgtgtgggggtccatggctctgaacctcagg : : EXON23 : : cagccaggaacgtactggtgaaaacacCGCAGCATGTCAAGATCACAGATtttgggc(tggcca)aactgctgggtgc : : ggaagagaaagaataccatgcagaaggaggcaaagtaaggaggtggctttaggtcagcc : : AGCATTTTCCTGACACCAGGGA : : 大寫部分是primer : : ()部分是限制每 : : 他對限制脢改變所以pcr結果會出現圖2 : : 至於圖1陷阱需要看實驗方法才能董 : : 這你就自己讀一下囉 : : 呵呵加油 : 圖一有陷阱? : 其實我看不懂圖一最後Wild的畫法好幾條虛線代表什麼? : 而且跑完第一次PCR用限制酶切後注意他已經做突變所以不會切他有星號文章有寫和原本不同了看圖是不準的 : 到底第二次PCR時會不會再放大它好像也沒講到 : 我覺得圖二應該跟圖一之後無關他只是要測它的敏感度 : 所以用WT下去稀釋直接下去跑PCR 然後用同樣的限制酶切 : 這邊看來好像第一次PCR完用限制酶切之後好像會在黏回去? 再回去看看內文囉 : 不過不知道會不會再放大? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.216.36.207