Re: [求救] 關於裸鼠活體注射實驗
有許多可以無限制繼代的細胞
像是癌症細胞
HYBRIDOMA
接者到小白鼠體內 產生腹水
大約兩三週就死掉了
所以 如果你是初代細胞
應該不會有這各問題
但有些供應小白鼠的單位
其鼠源並不是很好
也注意一下你的飼養管理吧
※ 引述《tincta (薰？那我的碇真嗣呢？)》之銘言：
: 事情是這樣的。
: 在下前一陣子將培養的細胞株，
: 以皮下注射的方式，
: 注射到裸鼠的皮下前後腿腳窩處（腹側面）。
: 在注射完一週時，
: 基本上鼠隻（N＝6）都還存活，
: 但我有發現鼠隻的眼睛以及腳指有不正常的腫大。
: 然後也不是很愛動。
: 但是再過一週，就只有2隻為活體。
: 老鼠肢體末端也呈現黑色壞死。
: 因為行政上的緣故，
: 所以我是在A實驗室培養細胞，
: 回溶於PBS（高溫滅菌但無過filter）中，
: 在騎車到實驗室B的動物房注射。
: 我在想我的裸鼠會大去，
: 是不是因為細胞株在運送過程中污染？
: 還是說因為我是第一次注射活體，
: 在沒有人指導前處理的情形下，
: 在操作上產生污染？
: （因為我有使用pipette，我後來有聽說，
: 事實上pipette是最容易污染的，
: 寧可使用塑膠用過即丟的auto-pipette比較保險。）
: 我後來也回想說，是不是我自己滅的PBS會有問題。
: （那也是我自己配的，用實驗室一般用藥配置）
: 我在想應該勢必要重新再來，
: 所以不曉得有沒有先進可以提醒我一下，哪些步驟應該要非常小心，
: 才不會又使裸鼠死亡？
: 另我想下次直接去藥局買醫療用的生理食鹽水來打散細胞，
: 以防止自己因為自己滅的PBS出問題而使裸鼠感染。
: 在此我想我要簡述一下我的實驗步驟：
: 將細胞株由培養的T25上以trp打下來，離心後再打散於medium中，
: 之後進行細胞計數，並取適量細胞液離心，取得十的七次方細胞數/每管。
: 此時去除上層medium，加入高溫滅菌過的PBS打散細胞，使細胞懸浮。
: 將裝在eppendroff中以預備好的細胞懸浮注射液在flow中，置入夾鍊袋中，
: 放在口袋中保持體溫，（騎車）至動物房。
: 以醫療用注射筒，皮下注射於裸鼠前後腿窩側腹處。
: 我目前想出的改進點是，不再使用pipette，
: 而使用用過即丟塑膠製auto-pipette，
: 以及在打散的步驟中，
: 使用醫療用針筒打散細胞株，
: 並且我想用藥局賣的醫療用生理食鹽水取代原本自己滅的PBS
: （但不知此點是否可行？）
: 所以還請各位版友多方指正，
: 真的很需要各位的幫忙。
: By seminar接近爆炸的碩一升碩二但卻是實驗室最大的忐忑研究生
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