Re: [求救] 關於裸鼠活體注射實驗

看板Biotech (生命科學)作者daniel2806 (Tomorrow is another day)時間17年前 (2008/07/11 21:37)推噓1(1推 0噓 3→)

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: ※ 引述《tincta (薰？那我的碇真嗣呢？)》之銘言： : : 事情是這樣的。 : : 在下前一陣子將培養的細胞株， : : 以皮下注射的方式， : : 注射到裸鼠的皮下前後腿腳窩處（腹側面）。 : : 在注射完一週時， : : 基本上鼠隻（N＝6）都還存活， : : 但我有發現鼠隻的眼睛以及腳指有不正常的腫大。 ^^^^^^^^^^ ^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 很明顯細胞轉移, 並非打在皮下(可以已經是在肌肉層) : : 然後也不是很愛動。 : : 但是再過一週，就只有2隻為活體。 : : 老鼠肢體末端也呈現黑色壞死。這裡考慮你的實驗目的為何?? 如果是為了長出tumor, 但是卻有其他不應該的現象可以考慮 1. 細胞數太多 2. 是否在注射細胞時, 已不小心刺穿腹膜, 已經屬於ip注射 : : 因為行政上的緣故， : : 所以我是在A實驗室培養細胞， : : 回溶於PBS（高溫滅菌但無過filter）中， : : 在騎車到實驗室B的動物房注射。 : : 我在想我的裸鼠會大去， : : 是不是因為細胞株在運送過程中污染？ : : 還是說因為我是第一次注射活體， : : 在沒有人指導前處理的情形下， : : 在操作上產生污染？ : : （因為我有使用pipette，我後來有聽說， : : 事實上pipette是最容易污染的， : : 寧可使用塑膠用過即丟的auto-pipette比較保險。） : : 我後來也回想說，是不是我自己滅的PBS會有問題。 : : （那也是我自己配的，用實驗室一般用藥配置） : : 我在想應該勢必要重新再來， : : 所以不曉得有沒有先進可以提醒我一下，哪些步驟應該要非常小心， : : 才不會又使裸鼠死亡？ : : 另我想下次直接去藥局買醫療用的生理食鹽水來打散細胞， : : 以防止自己因為自己滅的PBS出問題而使裸鼠感染。 : : 在此我想我要簡述一下我的實驗步驟： : : 將細胞株由培養的T25上以trp打下來，離心後再打散於medium中， : : 之後進行細胞計數，並取適量細胞液離心，取得十的七次方細胞數/每管。 : : 此時去除上層medium，加入高溫滅菌過的PBS打散細胞，使細胞懸浮。 : : 將裝在eppendroff中以預備好的細胞懸浮注射液在flow中，置入夾鍊袋中， : : 放在口袋中保持體溫，（騎車）至動物房。 ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 一般都是建議放置於冰上, 以減少細胞的代謝. : : 以醫療用注射筒，皮下注射於裸鼠前後腿窩側腹處。 ^^^^^^^^^^^^^^^^ 不同大小的針頭也會影響xenogen的結果, 一般可用24~26G : : 我目前想出的改進點是，不再使用pipette， : : 而使用用過即丟塑膠製auto-pipette， : : 以及在打散的步驟中， : : 使用醫療用針筒打散細胞株， : : 並且我想用藥局賣的醫療用生理食鹽水取代原本自己滅的PBS ^^^^^^^^^^^^^^^^ 我想應該沒有差別, 說不定更髒.... : : （但不知此點是否可行？） : : 所以還請各位版友多方指正， : : 真的很需要各位的幫忙。最後建議你可以依照你的細胞株的名子, 去找找paper, 大家一般施打的細胞數搭配實驗目的, 和設計的實驗時間, 細胞數量多→tumor長的快, 反之亦然. 加油!!! : : By seminar接近爆炸的碩一升碩二但卻是實驗室最大的忐忑研究生 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.89.228