Re: [求救]IP抓不到target protien
※ 引述《bider (買沉木)》之銘言：
: 小弟這幾天做IP
: 用monoclonal anti-mouse的1抗
: polyclonal anti-goat的2抗
: 結果western出來結果很多雜band
: 想請問有沒有前輩有類似經驗的可以解決@@
: 按理來說
: 不同的Fc應該不會有問題才對
: 是因為polyclonal造成的嗎?
今天考完試剛好有時間來研究一下
首先你的antigen是mouse protein
1st ab 是goat anti mouse
2nd ab 是XX anti goat 這樣嗎?
根據我遙遠的記憶(不好意思我好久沒作了@"@)
通常都會寫抗體的的物種(吧?)
這樣可以很清楚的表達每個蛋白質的來源
這是不相干的事情
只是好奇一下
IP或者其他免疫學方法會出問題通常都是一抗
因為二抗很容易就可以買到各式各樣很棒的抗體
然後就如同有人推文說的
一抗用polyclonal比較容易成功一點
不過這個抗體是哪來的?
如果是買來的他的data sheet有說可以作IP嗎?
有的話用他建議的濃度試試看
這樣還作不出來就可以把sales叫來抱怨了 XD
(前提是!! 你要先排除操作上的問題)
然後對買來的抗體不要太有信心
我試過買三隻才成功的
(所以我愛死RT了~~!)
真的作不出來請好心又利害的學長姐或同學幫你試試看吧
說不定真的是抗體的問題
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