Re: [求救]IP抓不到target protien

看板Biotech (生命科學)作者bider (買沉木)時間17年前 (2008/07/27 21:24)推噓2(2推 0噓 3→)

留言5則, 3人參與討論串4/4 (看更多)

※ 引述《sisyphus (變形蟲)》之銘言： : ※ 引述《bider (買沉木)》之銘言： : : 小弟這幾天做IP : : 用monoclonal anti-mouse的1抗 : : polyclonal anti-goat的2抗 : : 結果western出來結果很多雜band : : 想請問有沒有前輩有類似經驗的可以解決@@ : : 按理來說 : : 不同的Fc應該不會有問題才對 : : 是因為polyclonal造成的嗎? : 今天考完試剛好有時間來研究一下 : 首先你的antigen是mouse protein : 1st ab 是goat anti mouse : 2nd ab 是XX anti goat 這樣嗎? 應該這樣說 antigen用的 target protien Ab 他的2抗是 anti-mouse W是用 rabbit anti-goat的2抗是為了怕認到IP Ab 的heavy chain light chain才用不同2抗 : 根據我遙遠的記憶(不好意思我好久沒作了@"@) : 通常都會寫抗體的的物種(吧?) 是的但是由哪一種動物所做成的抗體應該沒有什麼差別吧@@ 不是很懂^^ : 這樣可以很清楚的表達每個蛋白質的來源 : 這是不相干的事情 : 只是好奇一下 : IP或者其他免疫學方法會出問題通常都是一抗 : 因為二抗很容易就可以買到各式各樣很棒的抗體 : 然後就如同有人推文說的 : 一抗用polyclonal比較容易成功一點但是我們家的monoclonal是認nature form 所以事情就很棘手 : 不過這個抗體是哪來的? : 如果是買來的他的data sheet有說可以作IP嗎? 是的抗體皆為commercial data sheet 有IP 打錯抱歉 : 有的話用他建議的濃度試試看 : 這樣還作不出來就可以把sales叫來抱怨了 XD : (前提是!! 你要先排除操作上的問題) : 然後對買來的抗體不要太有信心 : 我試過買三隻才成功的 : (所以我愛死RT了~~!) 呵呵對呀現在先改用RT測一下cDNA 而且抗體affinity真的是...看運氣... : 真的作不出來請好心又利害的學長姐或同學幫你試試看吧 : 說不定真的是抗體的問題我可能會跟advisor討論看看吧謝謝大家也祝熱心的大家實驗順利呀(∩_∩) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.170.122.219