Re: [求救] 為甚麼IP時，將Ab和beads cross link可 …

看板Biotech (生命科學)作者ColdP (......)時間17年前 (2008/08/15 04:17)推噓1(1推 0噓 0→)

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※ 引述《ligase (真的不是距離)》之銘言： : ※ 引述《boblu.bbs@beta.life.nthu.edu.tw (六百)》之銘言： : : IP 的時候 crosslink 不會減少 ab 的 heavy chain 和 light chain : : IP "western" 的時候才會減少偵測到的 heavy chain 和 light chain : : 另外如果你不是來抄作業的 : : 好歹說一下為什麼會想問這個問題 : 我不是來抄作業的 : 因為我現在做實驗遇到這個問題 : 但是前人以及我在網路上找到的其中的方法是可用DMP做crosslink : 我很努力找為甚麼可以降低的原因 : 可是真的不知道為甚麼 : 所以才發問的 : 不好意思沒有交代前因後果 : 讓你誤會了 : 謝謝你因為透過crosslink將Ab接到beads上，就等於將Ab的heavy chain，連同light chain(在non-reducing的情況下) 固定在beads上面；這樣就可以在IP過程最後的elution步驟中，大幅減少Ab的light chain及heavy chain自beads上elute出來的量。也因此可以降低heavy chain及light chain對最後elute出來的IP sample所造成的汙染。順帶一提，為何要用DMP呢? 其實用其他的crosslinker也不是不可以，但是DMP有個好處：他的官能基: imidoester在與primary amine反應後會帶positive charge，因此在DMP對protein上的primary amine (大部分是lysine)進行反應後，該位置的residue仍會保持原來的電性；這樣就可以減少Ab因為受到crosslinker造成的電性改變引發的對抗原affinity降低。但是，實際用哪種crosslinker最好，還是得透過實驗驗證最為穩當，畢竟不是每種Ab或beads都適合同樣的crosslinking condition...... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.195.10.33