[討論] ligation

看板Biotech (生命科學)作者 (認真過每一天)時間17年前 (2008/11/07 10:07), 編輯推噓10(1007)
留言17則, 8人參與, 7年前最新討論串1/2 (看更多)
一般在做ligation時都是vector + insert 去進行反應 如果說現在我有2個insert,把vector + insert 1 +insert 2,加在一起 ligase有辦法成功的將這三者接成一個環狀的plasmid嗎? (只是想知道這樣能否成功,不討論先接一個insert,再接另一個喔) (不考慮in frame,cutting site...etc這些問題的話) --------------- 不是我想偷懶啦XD 最近做了一個clone,裡面有insert 1和insert 2 下一步是搬到另外一個vector(兩端的cutting site是一樣的BstXI) 好死不死,insert 1和insert 2中間發生mutation,跑出一個BstXI 這下冏了,我無法用BstXI將 insert1 - insert2 整個搬出來。 原本的規畫 vector1: -------BstXI---insert1-----------insert2---BstXI---- mutation後的結果 vector1: -------BstXI---insert1---BstXI---insert2---BstXI---- 這樣能理解嗎? 我講得好亂>__<~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 134.208.24.2 ※ 編輯: lazyQ 來自: 134.208.24.2 (11/07 10:08)

11/07 10:55, , 1F
你知道 三架飛機撞在一起的機率有多大嗎
11/07 10:55, 1F

11/07 11:04, , 2F
你的東西是positional digestion就可以,TA的話注意正反接
11/07 11:04, 2F

11/07 11:05, , 3F
也不是不行,但是你要有大量rapid screen的心理準備(百來株吧
11/07 11:05, 3F

11/07 11:20, , 4F
不考慮cutting site的話會做到死吧...
11/07 11:20, 4F

11/07 11:21, , 5F
抱歉說錯,是directional digestion
11/07 11:21, 5F

11/07 12:31, , 6F
我做過三個接點是不同cutting site的
11/07 12:31, 6F

11/07 12:32, , 7F
還有二端不同cutting site 中間blunt end
11/07 12:32, 7F

11/07 12:33, , 8F
老實說我覺的跟一般ligation沒什麼不同啊
11/07 12:33, 8F

11/07 12:35, , 9F
vector切的夠乾淨的話 挑16顆就可以挑到很多個了
11/07 12:35, 9F

11/07 12:39, , 10F
抱歉我百來株是指都是TA的情形,用不同切點是快很多沒錯
11/07 12:39, 10F

11/07 14:10, , 11F
為什麼我覺得你想偷懶
11/07 14:10, 11F
※ 編輯: lazyQ 來自: 134.208.24.2 (11/07 14:26)

11/07 16:38, , 12F
那個突變是你要的嗎?不然重新clone不就沒這個問題了?
11/07 16:38, 12F

11/07 21:16, , 13F
其實推薦用PCR phusion很難有mutation
11/07 21:16, 13F

11/08 11:21, , 14F
等等..都mutation了這樣的gene你能用嗎?重新clone吧
11/08 11:21, 14F

11/08 11:22, , 15F
phusion是真的滿強大的...
11/08 11:22, 15F

11/11 01:07, , 16F
為什麼我覺得你想偷懶 https://noxiv.com
11/11 01:07, 16F

01/03 16:47, 7年前 , 17F
老實說我覺的跟一般li https://muxiv.com
01/03 16:47, 17F
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