Re: [求救] cloning的問題
※ 引述《nidus (咕嘰)》之銘言：
: 實驗流程大略如下：
: ligation以及圖菌後
: 隔天長出colony
: 挑單一colony做cloning PCR
長出幾顆? 有沒有可能是Self-ligation?
Competent cells的Copy number跟plasmid的大小可以推算出預期colony數
: 檢測是否目標基因有接進vector中
: 而我遇到的情況是cloning PCR檢測有看到目標基因被放大
negative control有沒有做? 水汙染了?
: 而我將該菌珠培養O/N後 隔天抽plasmid
: 再做enzyme digestion 結果卻切不出那段基因出來
: 而且plasmid的位子好像在空的vector位子
: 送定序出來的結果也很詭異
: ps我利用vector上的CMV30為primer 定序結果不到沒有我塞進去的gene
: 序列也跟vector不同
: 請問有人遇到跟我類似的狀況嗎？？
這不詭異啊，就是沒成功嘛，重做吧
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 134.208.23.97
推
12/08 14:02, , 1F
12/08 14:02, 1F
討論串 (同標題文章)
Biotech 近期熱門文章
PTT職涯區 即時熱門文章
266
988