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[求救] PCR結果一直是smear的狀態？！

看板Biotech (生命科學)作者 (落花滿天蔽月光)時間17年前 (2009/02/25 15:48), 編輯推噓7(7推 0噓 5→)
留言12則, 9人參與, 7年前最新討論串1/1
目前在做PCR 之前做不同的時間點都做的出來 現在重P～跑出來的結果 有的時間點有band 但大部份卻都看不出來有 band 都糊糊的一片 是因為reaction buffer裡面離子濃度的問題嗎 我的annealing 溫度是67 度 extention 的時間是1 min （片段約1.2kb） -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 123.240.155.105
推
02/25 15:57, , 1F
可能是template沒有保存好,跑片膠看看有沒有smear
02/25 15:57, 1F
→
02/25 15:58, , 2F
不然就是縮短染色與退染時間...
02/25 15:58, 2F
→
02/25 16:12, , 3F
template 有試過～是沒有問題的～我會試試縮短染膠的
02/25 16:12, 3F
→
02/25 16:13, , 4F
的時間～感恩阿！
02/25 16:13, 4F
推
02/25 21:51, , 5F
我有遇過這樣的情況 結果是mg的濃度不對 稍微調一下就好了
02/25 21:51, 5F
推
02/25 21:55, , 6F
你有沒有查過你的primer適合哪種溫度呀?
02/25 21:55, 6F
推
02/25 21:58, , 7F
Mg的濃度大概多少到多少比較好？
02/25 21:58, 7F
推
02/25 22:59, , 8F
可以試試降低Mg濃度或用hot-start 的Taq做看看
02/25 22:59, 8F
推
02/26 06:52, , 9F
請問一下重p的時候，template是用原本的還是用PCR product?
02/26 06:52, 9F
推
02/27 18:09, , 10F
buffer或是dNTP壞掉 之前也是這樣的結果
02/27 18:09, 10F
→
11/11 01:19, , 11F
你有沒有查過你的pri https://muxiv.com
11/11 01:19, 11F
→
01/03 16:51, 7年前 , 12F
buffer或是dNT https://muxiv.com
01/03 16:51, 12F
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