[求救] kupffer cell trypsin-EDTA 濃度要多少才會下來?

看板Biotech (生命科學)作者 (PAPA)時間17年前 (2009/03/21 09:51), 編輯推噓3(303)
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請問利用貼盤方式洗去非kupffer cell, culture 24hr 之後, 用D-PBS WASH 加入trypsin(?%) 作用?分鐘 加入含血清medium中合, 收集細胞做實驗。 我試過0.05% 1min--------------不動如山 我試過0.05% 2min--------------2-3成 我試過0.5% 1min--------------大約一半 我試過0.5% 2min--------------7成 請問有人有經驗嗎? 因為細包很少,沒有辦法一直試, 請有經驗的前輩告訴我,少走一些冤枉路,謝謝!! ps我之前看文章有用到0.5%的1min,但周遭人都跟我說太膿,細胞會死, 我去染色看存活率是還可以,但不知會不會有其它影響。 我用corning 的dish。 不考慮用刮的,我需要完整的細胞。 謝謝各位的回答! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.167.7.85

03/21 12:11, , 1F
0.05% 作用的溫度? 37 or RT?
03/21 12:11, 1F

03/21 18:55, , 2F
皆是37度,放回培養箱中等。
03/21 18:55, 2F

03/21 21:13, , 3F
有加EDTA嗎?
03/21 21:13, 3F

03/22 10:19, , 4F
我買的是trypsin-EDTA 已經有含了
03/22 10:19, 4F

04/08 01:50, , 5F
會死吧用TRPSIN,改用6.85mM EDTA only,15min 試試看
04/08 01:50, 5F

04/08 01:51, , 6F
我自己是用來打腹水巨噬細胞,供參考~
04/08 01:51, 6F
文章代碼(AID): #19n4WkSr (Biotech)
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