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[求救] SDS-PAGE的膠不會凝

看板Biotech (生命科學)作者 (所有人都跟我犯沖嗎?)時間15年前 (2009/06/20 21:14), 編輯推噓21(21推 0噓 18→)
留言39則, 22人參與, 5年前最新討論串1/1
我一直都在跑SDS，之前做的膠都會凝固 可是最近做的上層膠都不太凝固 下層膠凝結的速度也沒有很快 可是上層膠不是不會凝，是倒掉之後還是有上層膠存在，但是沒有完全凝固 而是有點稠稠的 我10% APS都是當天現泡的，應該沒有問題 膠的配方： running gel(10%) stacking del(4%) ---------------------------------------------------------------------------- DDH2O 4.82ml 3.2ml 1.5M Tris(ph8.8) 2.5ml 1250μl(0.5M Tris(ph6.8)) 40% acrydmide/bis 2.5ml 500μl 10% SDS 100μl 50μl 10% APS 50μl 25μl TEMED 15μl 7.5μl 請大家告訴我，我要更改哪一個的量呢? 我現在在測試提高APS跟TEMED的量，下層膠凝固良好，上層膠正在測試中 等做完我會跟大家報告結果 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.130.98.110
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06/20 21:21, , 1F
對了,有一說冰過的膠跑起來比較漂亮,那要冰多久啊?
06/20 21:21, 1F
推
06/20 21:28, , 2F
APS太少,我下膠APS用150ul
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06/20 21:29, , 3F
我通常膠做好會放在夾鏈袋裡,在裡面放一點ddih2o
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06/20 21:30, , 4F
不會當天做當天用,都至少放4度Covernight
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推
06/20 22:01, , 5F
通常是APS問題.借別家的來配看看
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推
06/20 22:51, , 6F
APS加多一點,10ml膠可加到100ul
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06/20 23:09, , 7F
我剛剛試著將APS跟TEMED變2倍,結果凝了耶!
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推
06/20 23:13, , 8F
放37度放個半小時凝比較快
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06/20 23:35, , 9F
APS會潮掉,拿壞掉的粉來配是沒效的,而且天天開瓶現泡也不好
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推
06/21 00:41, , 10F
我會把一定量的APS秤好放入microtube用parafilm封好,要用
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06/21 00:42, , 11F
時直接加dH2O即可;一次秤20管,也不怕潮掉,以上供參考~
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推
06/21 01:40, , 12F
我們都把APS stock分裝數管放在-20度C存放, 要用再回溫.
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06/21 02:28, , 13F
所以跟TEMED的量沒有關係囉!
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我聽說APS配成stock不好耶!好像效果會降低
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我實驗室的APS有變成塊狀那就是潮掉的跡象嗎?
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推
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自由基是APS提供的 TEMED只是加快反應
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APS加多一點應該就沒關係了 TEMED多點只是凝比較快
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推
06/21 07:47, , 18F
APS要放防潮箱比較好 真的差很多
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推
06/21 11:56, , 19F
結塊就是受潮了 失去很大的效用 請買新的
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推
06/21 14:33, , 20F
一樓 我們家的SDSPAGE冰過會散掉耶 跑起來整片糊掉 囧
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我的不會，4度C放三個禮拜，還是一樣漂亮
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06/21 15:02, , 22F
很多lab的APS都不知已潮掉,所以用太嚴謹的方式保存使用,配
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過新的就知道,4度C放幾個月,效果還是超好
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06/21 17:50, , 24F
APS太少+1 還有APS我是都用現泡的 效果不錯
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推
06/21 19:12, , 25F
想請問..如果是分裝冰起來...放冰箱不會比較容易受潮
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嗎?..還是說大家都會用parafilm封口?
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推
06/21 19:52, , 27F
直接整罐配好再分裝去-20凍起來不就好　? 可以拿一些
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06/21 19:53, , 28F
去4度放者　我們lab都這樣做 APS還沒出過問題
06/21 19:53, 28F
推
06/21 20:29, , 29F
鮮配比較好~實驗室是公共空間每個人習觀不一樣!不建議整罐
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06/21 20:30, , 30F
一次配完~沒配完的我們會放在防潮箱!配完當下沒用完的放-20
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06/21 20:31, , 31F
慣 @@
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推
06/22 00:12, , 32F
我之前APS都是TEMED的十倍量 要調整凝結速度就兩個一起改
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推
06/22 00:42, , 33F
APS配好分裝冰-20~一個月用也沒問題
06/22 00:42, 33F
推
06/23 01:55, , 34F
TAMED需要加那麼多嗎＠＠我們家都只加3ul耶
06/23 01:55, 34F
推
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下膠APS加太少(100ul)，TEMED量太多(5ul)！
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上膠的話以6ml計算的話，APS 60ul, TEMED 6ul這樣會很好凝
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06/24 12:47, , 37F
推某S大，APS是提供架橋(凝固)，TEMED是催化劑(多也沒用)
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11/11 01:32, , 38F
APS配好分裝冰-20 https://noxiv.com
11/11 01:32, 38F
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01/03 16:56, 5年前 , 39F
直接整罐配好再分裝去- https://muxiv.com
01/03 16:56, 39F
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