Re: [求救] 關於表達蛋白以及製作相應抗體的問題
謝謝大家的幫助
不過我又有個問題
就是細菌裡面也有transmembrane protein
那這些蛋白質在細菌中是怎麼folding的呢
他們應該沒有ER吧
感謝之前某版友幫忙查資料
回文裡面有寫
"their N-terminal domains targeted to the ER lumen during synthesis "
希望知道的人可為小弟解惑
感激不盡!
※ 引述《YuDavid (討厭失眠)》之銘言：
: 各位高手大家好
: 由於時間有點緊湊同時基礎知識又不夠紮實
: 所以來這邊請教 與此同時我也會多查點資料做功課
: 謝謝各位
: 首先 三月份開始我們老闆就叫我們表達一個叫做PepT1的protein
: 這個蛋白是一個有12個transmembrane region的transporter
: 由於對實驗基礎知識缺乏
: 今天才知道 原來transmembrane蛋白質沒辦法表達 囧
: 至少似乎用傳統的方法(IPTG induction)是沒有東西的@@
: 那問題來了
: 我們有個同學說 會不會是因為他是binding在膜上
: 所以你不可能把target protein給釣出來 跑PAGE當然就沒有band了
: 但是又有個同學說你在E.coli系統裡面做的蛋白未必也會乖乖binding在細胞膜上
: 而可能是疏水作用力（跨膜區域是疏水的）的關係所以translation無法順利進行
: 請問Transmembrane蛋白無法表達的問題是上述哪種 或者還有別的原因呢?
: 那有沒有比較特別的方式/技術 可以把我們要的蛋白給做出來呢?
: 另外 我們本來傻呼呼的想要做抗體 以後做western甚至IHC
: 假設真的表達不出來 我們只表達某段exterior的部分
: 作western 應該不會有問題吧?
: IHC似乎就不太可能了吧？
: 因為這個實驗的抗體要求似乎非常高 囧
: 主要的問題如上
: 感謝各位花時間閱讀並指教
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