[求救] 關於 western 的 band

看板Biotech (生命科學)作者 (我會好好加油^^)時間16年前 (2009/07/28 02:46), 編輯推噓5(504)
留言9則, 6人參與, 最新討論串1/3 (看更多)
想請較各位 最近在跑 cytochrome c 所以必須要抽細胞質的protein 可是發現跑出來的 band 會呈現以下情形 1. http://w74429.pixnet.net/album/photo/106668620 第一條是 GAPDH 第二條是 cytochrome c 兩個protein是同一片膠同一批sample (就是一片膠看兩個potein) G3 跑出來的 band 很漂亮 不過 cytochrome c 卻很醜@@" 一開始原以為可能抗體太強,壓片時間太久所以導致band很粗 不過後來發現 如果只壓個10秒20秒之類的 band 一樣很粗... 但是就會像是黑黑空格沒有補滿的感覺 有點像這樣 (類似第一個 sample ) http://w74429.pixnet.net/album/photo/106668633 不過是八個sample都會這樣.. 這看起來又不像是抗體太強,而燒掉的白色空格 已經試很多次了還是這樣@@" 之前有學姐建議我跑高一點 % 數的膠 我有試過12% (照片是12%膠跑出來的圖) 然後也有試過15%,但是15%也是一樣的結果... 我們家的抗體是 BD ( 編號556433 )的 cytochrome c 然後我一抗都只有4度C overnight 10hr 而已 請問有經驗的各位 這有可能是什麼問題呢? 該怎麼改進呢? 謝謝大家的指教!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.229.173.66 ※ 編輯: linwei 來自: 220.229.173.66 (07/28 02:48)

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這種亮度可以把底片放上去1秒立刻拿起來了吧Orz
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你進暗房看你的membrane 應該可以看到螢光吧XD
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其實我不太懂你問題 你的問題是說 下方那一排要怎麼更
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漂亮嗎?
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假如是signal過強造成壓片不好壓 可以調整抗體濃度
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抗體再稀釋吧 1:5000
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跑膠時, 可以試試loading少一點protein
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我推測原po是不是在問 有band會缺角?
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嘿 我下面文章有比較詳細的圖呦~~^^
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文章代碼(AID): #1ARVNkXI (Biotech)
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