[求救] 我的western blot的band都會變成啞鈴狀> <

看板Biotech (生命科學)作者 (紫戀情迷)時間16年前 (2010/01/07 18:58), 編輯推噓3(307)
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先附上我的western blot圖 http://tw.myblog.yahoo.com/jw!.K4szqWcFxQ4TGqjJRH1pCNO/article?mid=104&prev=-1&next=77 我所使用的是8% SDS-PAGE 膠的配方是Tris-glycine系統from Harlow and Lane(1988) Stacking以80V跑 Resolving是以100~120V跑 transfer是用AB的semi-dry 6*9一片 50mA 2hr blocking 3% milk RT 30min~1hr 1抗/3% BSA 1:1000 4度 overnight 2抗/3% milk RT 1hr TBST 4次 5min 我剛開始做WB時並沒有出現這種情況 但近期的band都會呈現像骨頭一樣 可以請板上有經驗的人指導我一下可能哪個步驟導致這樣的情況呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.1.187

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我發現我的也會 只是啞鈴沒有那麼大 也是8%的
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sample的濃度和體積呢?
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是不是loading完sample才補dye 是的話會這樣 被擠開
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http://0rz.tw/2QJHG loading時慢一點 沿邊邊加試試看
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sample的濃度是325ug 體積是65ul dye是10X
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我的dye跟sample一起95~100度 5min 所以沒有再補dye
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因為我一次都跑六片膠所以sample體積大 但是每個well只
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loading sample 10ul 50ug的
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量 (抱歉剛剛打到斷掉)
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bider 謝謝我這次改變一下loading速度
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文章代碼(AID): #1BHRv5Wu (Biotech)
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