[求救] 關於GFP transfection
最近做了transfection,
用lipofectamine transfect 一個帶有GFP的plasmid,
transfect完隔兩天,螢光顯微鏡下看到有發綠色螢光的細胞約50%,
之後我就繼續用加了G418的medium篩, (plasmid上有neomycine resistance gene)
細胞持續養了兩個禮拜, 可是這段期間有綠色螢光的亮點卻越來越少,
今天看大約只剩10~20%了.
細胞的型態都正常,存活數量也持續增多,
抗生素的濃度我是參考過許多相關paper的濃度.
到底是甚麼原因呢?
以下是我的想法,若有觀念錯誤請大家指證:
我的plasmid上是用CMV promoter,
照理說,GFP gene在真核細胞內應該會持續被活化表現,
細胞內應該一直會有GFP protein.
所以若細胞有這個plasmid, 應該會持續散發綠色螢光.
那麼在抗生素篩選下,細胞數量也有增多,為何發螢光的細胞數量越來越少呢?
請大家指點我是否有觀念錯誤,
謝謝! :)
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