[求救] RT-PCR有產物,但Real time PCR沒有產物
第一次來貴版拜訪 (因為我已經快發瘋了)
請多多指教 並救救我（跪求）
我要偵測處理胚胎後 特定基因的表現量
因此用roche的軟體設計real time 的primer
這對primer在RT-PCR已經有產物 並且送定序確認過了
因此要以real time PCR做定量
但是 我的產物大小為203bp control是已經insert產物的質體
RT PCR條件為 cDNA濃度 50ng/ul
94度 1 min, 58度 40sec, 72度 20sec
real time PCR條件為 cDNA濃度 200ng/ul<--sales建議5x dilute
(因為50ng/ul 做不出來)
95度 10sec, 58度 20sec, 72度 20sec <---melting curve的peak和control一樣
但是電泳都沒有band 而是smear的樣子
40sec <---melting curve的peak比control低溫
電泳有2個band 一個在200多 一個在300多
請問接下來 我要修改哪個條件??
謝謝大家
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 120.107.169.145
※ 編輯: itsmormon 來自: 120.107.169.145 (03/06 15:45)
推
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