[求救] 請問lentivius的問題~~十萬火急~~畢業困難

看板Biotech (生命科學)作者 (觀音兵)時間16年前 (2010/03/27 16:54), 編輯推噓2(208)
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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 板上各位好 最近~~我開始使用lentivirus 系統~~我從中研院訂購了幾組shRNA~~再lentivirus前 先將幾組shRNA利用transfection的方式將plasmid送到HEK-293T細胞,做knockdown 照理來說,會在western blot測試中,看到目標蛋白被抑制,可是幾次結果下來, 並未看出差異。 我是使用invitrogen的Lipofectamine 2000將plasmid送入細胞,48小時候收蛋白, 過程中並無篩許,只有對照pEGFP-plasmid做為control。 而這幾組shRNA中研院的測試結果都是有效的,所以在我pre-test的結果來看,該己 組shRNA就沒有效果,請問各位前輩我有沒有忽略什麼細節或少考慮了什麼。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 134.208.25.184

03/27 17:07, , 1F
lentivirus shRNA 用感染的效果比較會出來,transfect比較沒用
03/27 17:07, 1F

03/27 17:37, , 2F
packaging cell line的表現似乎不太明顯喔。
03/27 17:37, 2F

03/27 20:22, , 3F
我也有這樣的疑問 可以減少RNA 卻不改變蛋白質
03/27 20:22, 3F

03/27 23:24, , 4F
virus的好處適用於難transfect的細胞
03/27 23:24, 4F

03/27 23:27, , 5F
可是copy數明顯比transfect來得少
03/27 23:27, 5F

03/27 23:27, , 6F
如果HEK293T本來大量表現該基因
03/27 23:27, 6F

03/27 23:28, , 7F
"大概"看不太出來吧 = =" (這樣講沒錯吧XD?)
03/27 23:28, 7F

03/27 23:33, , 8F
調整 transfection的時間跟plasmid的量吧
03/27 23:33, 8F

03/28 14:47, , 9F
也就是說transfection 單一shRNA plasmid 48H看不出差異嗎?
03/28 14:47, 9F

03/28 19:16, , 10F
transfect效率好的話, 大概是還要更多時間XD???
03/28 19:16, 10F
文章代碼(AID): #1BhSUv4y (Biotech)
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