[討論] 有關Western的小問題

看板Biotech (生命科學)作者 (複合質體)時間16年前 (2010/04/16 12:19), 編輯推噓1(102)
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我目前想要收細胞下來,然後破細胞,收集胞內蛋白 之前跑2D是先將dish裡面的medium吸掉,再用PBS wash 然後加入ripa 500uL 下去破細胞,然後酒精沉澱 再用Rehydration buffer回溶,接著就上IEF,再上電泳 目前我要做western,實驗室其他有做western的人說 先不要把dish裡面的medium吸掉,而是先用PBS wssh 然後ripa量不要下這麼大,否則會影響接下來的western 我想請問,真的會影響嗎??? 我之前下這樣的量 2D跑起來也還OK,只是不知道western這樣做真的會影響嗎 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.101.28.123

04/16 19:17, , 1F
沒差吧 我是不知道不吸medium的理由是啥?
04/16 19:17, 1F

04/16 19:18, , 2F
破完細胞離心取上清液就好 不用酒精沉澱
04/16 19:18, 2F

04/16 19:20, , 3F
RIPA量加多就蛋白比較稀 你可以定量一下通常每well 30-50ug
04/16 19:20, 3F
文章代碼(AID): #1Bn-L1bM (Biotech)
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