[求救] 關於protein refolding
板上各位大大好!
小弟最近要做關於inclusion body 的回溶以及refolding.
使用的是Thermo 的B-PER Bacterial Protein Extraction Reagent來做細菌的
蛋白質萃取，後以Inclusion Body Solubilization Reagent來回溶Insoluble protein。
後將已回溶的protein以針頭注入半透膜做dialysis，以六小時一次做稀釋的動作，先加
入6M Urea，後以25mM Tris-Hcl做稀釋。但我發現到最後似乎沉澱物在半透膜上形成一
層膜狀物將半透膜堵住了。
後將完全透析完的內容物做SDS-PAGE確認，發現沒有東西。
整個透析在4度Ｃ下進行，在萃取部分有多加入lysozyme，Dnase及PMSF，Dialysis過程
有加入DTT。
所以我的問題如下：
第一.這個將半透膜堵住的現象是正常的嗎？
第二.PROTOCOL中有一步要用27000g高速離心，由於我的sample很少，所以我無法用
超高速離心（該步驟為以Inclusion Body Solubilization Reagent回溶後離心），這
個步驟有差嗎？我參考其他protocol並無此步驟。
請各位有經驗的版大給予指教，感謝不盡。
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