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[問題]GST純化的resin

看板Biotech (生命科學)作者 (~sarah~)時間15年前 (2010/08/09 23:26), 編輯推噓4(4推 0噓 9→)
留言13則, 5人參與, 最新討論串1/4 (看更多)
我想請問純化GST蛋白的resin大家會重複使用嗎??? 如果是不同的蛋白 會不會重新配製呢?(因為怕污染這樣!!??) 雖然說有regeneration這個步驟 那是不是就乾淨了呢? 可以繼續使用 不同蛋白也沒關係?? 因為有學長講說怕汙染 所以一直重配@@ 那不就都不用regeneration 用過就換掉~這樣是不是太浪費??? 另外 我再問一下~有人用pQE30作為表現蛋白的系統嗎?? 因為我一直找不到好的誘導條件ˊˋ 網路上查的也一直在try~~ 也都沒比較明顯的band> < -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.27.190.165
推
08/09 23:35, , 1F
不放心就多洗幾次 如果未來是要跑western這種條帶
08/09 23:35, 1F
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08/09 23:36, , 2F
會分開的 那有其他蛋白存在也沒有關係
08/09 23:36, 2F
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08/09 23:36, , 3F
你純化前不就是有無數種蛋白質
08/09 23:36, 3F
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08/09 23:47, , 4F
可是我純化完是要直接送去做抗體的耶~而且我怕汙染的是上
08/09 23:47, 4F
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08/09 23:48, , 5F
一個不同GST蛋白的東西壓~~
08/09 23:48, 5F
推
08/10 02:17, , 6F
如果真的不放心 那就跑一片western膠染comassive blue
08/10 02:17, 6F
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08/10 02:17, , 7F
就知道洗的到底乾不乾淨
08/10 02:17, 7F
推
08/10 11:08, , 8F
單純HIS純化完+濃縮如果可以得到很好的single band
08/10 11:08, 8F
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08/10 11:09, , 9F
算運氣好..通常都還要過gel filtration拿到更純的
08/10 11:09, 9F
推
08/11 03:35, , 10F
是有洗的這麼不乾淨嗎 囧 再說你一般存resin的條件下
08/11 03:35, 10F
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08/11 03:35, , 11F
蛋白也不會stable到哪去 而且大多不會一個tag就拿到純的
08/11 03:35, 11F
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08/11 03:35, , 12F
大不了同一種蛋白就一直重複用那一批resin 不夠再拿新的
08/11 03:35, 12F
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08/11 03:36, , 13F
補一點 有做好wash跟regeneration 可以用很久的
08/11 03:36, 13F
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