Re: [問題]GST純化的resin

看板Biotech (生命科學)作者sarahls (~sarah~)時間15年前 (2010/08/13 00:34)推噓1(1推 0噓 1→)

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※ 引述《aggaci (台南工作的基隆人)》之銘言： : ※ 引述《sarahls (~sarah~)》之銘言： : : 我想請問純化GST蛋白的resin大家會重複使用嗎??? : 會重複使用 : 我們以前會用6M Guanidine-HCl去洗 : : 如果是不同的蛋白 : : 會不會重新配製呢?(因為怕污染這樣!!??) : 不會，我作的時候從來沒汙染的情形 : : 雖然說有regeneration這個步驟 : : 那是不是就乾淨了呢? : : 可以繼續使用 : : 不同蛋白也沒關係?? : 理論上是的 : : 因為有學長講說怕汙染 : : 所以一直重配@@ : : 那不就都不用regeneration : : 用過就換掉~這樣是不是太浪費??? : 有點浪費我就是覺得太浪費才會上來問問學長就說怕會汙染~可是我就覺得能重複用卻又很擔心XD~直到網路查到有protocol說不同蛋白regeneration後可以再使用就放心多了~再另外問一下同一種蛋白重複用3次~之後他的結合能力會下降嗎?? 因為我有看到用3次後要regeneration! : : 另外 : : 我再問一下~有人用pQE30作為表現蛋白的系統嗎?? : : 因為我一直找不到好的誘導條件ˊˋ : : 網路上查的也一直在try~~ : : 也都沒比較明顯的band> < : 你怎麼看有沒表現蛋白？只看soluble fraction嗎？ : 還是看total cell extract? : western blot是否做過？我有做western blot阿~泡一抗二抗後壓片沒東西耶= = 我以前做過一次有band的~可是我最近再做又沒有而且我也換了不同的competent cell去表現也沒比較好阿> < 之前是BL21 後來還有SG13009(這有人聽過嗎?XD) M15這3種印象中有的那一次是BL21的吧 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.27.180.151