[求救] real time PCR
各位前輩好~
又來詢問有關於real rime PCR......真是問題一重又一重ORZ
目前使用biorad IQ5及eva green，原廠耗材
現在每個樣本都作三重複，差距最大只有到0.3cycle(還是這樣也算大?)
但是standard一直都不好
standard的兩重覆其實也不差，但是efficiency就是太高
這些primer之前已經有先用其他樣本測試過efficiency，都有97-100.5%之間
是不是序列稀釋的問題比較大?
為什麼再也做不出當時的序列稀釋了~~~~~
我一次大約操作72個well
全部樣本都加完之後才放standard，在全部一起蓋蓋子
目前的稀釋操作方法是每一管都會換tip，盡量都在液面操作
並且會小小力的vortex一下，然後又彈管子，也會spin down，最後在pipetting幾下
請問還有甚麼可以努力的空間???
謝謝
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偶開天眼覷紅塵
可憐身是眼中人
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