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Re: [求救] SDS PAGE完全沒有band 除了marker

看板Biotech (生命科學)作者 (MADAO)時間15年前 (2011/02/27 18:57), 編輯推噓4(4推 0噓 13→)
留言17則, 7人參與, 最新討論串2/2 (看更多)
1. Check 上層與下層緩衝液的酸鹼值 2. CB染色在能看到的範圍，蛋白量至少需要1 microgram 3. destain是不是過久了 4. 沒有蛋白表現(作一個WELL當正控制組) -- 所有技術上的努力都要由關心人類和其命運出發 為了讓人類心智的創造物有益而不是有害 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 223.139.52.74 ※ 編輯: McRay 來自: 223.139.52.74 (02/27 18:58) ※ 編輯: McRay 來自: 223.139.52.74 (02/27 18:58)
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02/27 19:23, , 1F
謝謝你回應我~destain剛配不久且其他人也用同一罐destain
02/27 19:23, 1F
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02/27 19:24, , 2F
應該是不會有問題 我用了不同時期做的同一個clone
02/27 19:24, 2F
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02/27 19:25, , 3F
做出的蛋白做過positive control但是連positive control都
02/27 19:25, 3F
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02/27 19:26, , 4F
不見了~所以我才覺得很困擾
02/27 19:26, 4F
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02/27 19:28, , 5F
請問上下膠緩衝液酸鹼值會影響他完全都空白(樣品)的結果嗎
02/27 19:28, 5F
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02/27 21:03, , 6F
整條都空白就是系統有問題 酸鹼值影響Glycine/Tricine電性
02/27 21:03, 6F
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02/27 21:06, , 7F
Check protocol 重配所有的緩衝液與sample buffer
02/27 21:06, 7F
推
02/28 00:02, , 8F
load BSA in one of the well...
02/28 00:02, 8F
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02/28 17:13, , 9F
原po不是有說marker有染到?
02/28 17:13, 9F
推
03/02 11:59, , 10F
marker應該是pre-stain的吧～
03/02 11:59, 10F
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03/02 12:01, , 11F
你的dye跟sample buffer是加一起的？如果marker跑正常有出來
03/02 12:01, 11F
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03/02 12:02, , 12F
表示電泳系統沒問題吧～你那個positive之前有跑過沒問題嗎？
03/02 12:02, 12F
推
03/02 15:17, , 13F
denature 真的有點久. sample的pH值可能已經偏掉了
03/02 15:17, 13F
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03/02 15:18, , 14F
lane是空的就是沒有protein,所以一是 buffer有問題
03/02 15:18, 14F
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03/02 15:19, , 15F
另一個是protein degradation.也許先確定不是這兩個問題再
03/02 15:19, 15F
推
03/03 17:36, , 16F
MARKER正常表示你蛋白質樣品有問題,可能沒表現或是降解
03/03 17:36, 16F
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03/03 17:37, , 17F
掉了 或是蛋白質總量低於CBR的偵測極限
03/03 17:37, 17F
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