[求救] 關於s-nitrosothiol(RSNO)之螢光偵測法問題...
小弟目前將小分子RSNO, GSNO(S-nitrosoglutathione)
先以Hg來使GSNO的NO group 釋放後和2,3 diaminonaphthalene（DAN）
反應30min後形成螢光產物NAT 設定EX：306, EM:430來觀察螢光值
並加入NaOH終止反應
另以不含Hg,Hg(-)當作blank 以文獻中所說的方法 比較Hg(+)/(-)螢光值差
推估GSNO所釋放的NO量
以上方法用來配製GSNO的standard curve
不過這幾次都發現30min後 1 uM, 0.5 uM及 0.25 uM其Hg(+)確實高於Hg(-)
低濃度的GSNO（0.125 uM）之後其Hg(+)組螢光值低於Hg(-)
這樣意味著這些組在30 min後其NAT量低於blank
Hg(-)照理來說不應該會產生NAT 更不應該高於Hg(+)
目前認為有以下原因：
1.低濃度GSNO在檢測下限 故螢光值會飄動
2.NAT在30min內有產生dacay現象 （故縮短時間可能可以看到Hg(+)高於Hg(-)）
不知道有沒有經驗大大能指導 感激不盡！！！
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