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[求救] reverse genetics做flu virus

看板Biotech (生命科學)作者 (幹你媽的鬼鬼)時間14年前 (2011/06/22 15:08), 編輯推噓3(3推 0噓 10→)
留言13則, 3人參與, 最新討論串1/1
我用的方式為 以Opti-MEM稀釋lipofectamine(92:8) 5分鐘 再以Opti-MEM稀釋8ug plasmid到總量100ul 混合20分鐘以上最晚到半小時後即加入6well中的MDCK+293T的co-culture (各7.5*10^5) 此時的medium並沒有antibiotics 隔天換infectious medium 再隔天把supernatant收下取500ul到10cm dish中八分滿的MDCK去amplify 但是量似乎一直很少 甚至似乎沒有 以plaque assay定量總是沒有點出來 有沒有高手可以幫忙一下 感謝 -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.130.155
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06/22 21:09, , 1F
同IP推一下XD
06/22 21:09, 1F
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06/23 00:18, , 2F
樓上克隆王
06/23 00:18, 2F
推
06/23 12:39, , 3F
你用的SYSTEM是12 PLASMID 還是8的?
06/23 12:39, 3F
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06/23 14:10, , 4F
8的
06/23 14:10, 4F
推
06/23 22:33, , 5F
MDCK和293的比例可能要調一下 書上雖然是這樣寫
06/23 22:33, 5F
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06/23 22:34, , 6F
但是MDCK會很強勢的生長把293T鏟起來 特別你的細胞又一樣
06/23 22:34, 6F
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06/23 22:34, , 7F
而且八個的不像12個的有四個RNP expression plasmid
06/23 22:34, 7F
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06/23 22:35, , 8F
八個都是POL1-POL2 system的 會比較慢產生病毒
06/23 22:35, 8F
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06/23 22:37, , 9F
可以試試看用10CM DISH去transfect 然後plasmid用多一點
06/23 22:37, 9F
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06/23 22:38, , 10F
我之前也TRY了很多次條件後來titer才出來
06/23 22:38, 10F
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06/24 12:58, , 11F
所以MDCK有可能阻礙293T導致我transfect的效果失效嗎
06/24 12:58, 11F
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06/24 12:59, , 12F
感覺12 plasmid的效率比較好?
06/24 12:59, 12F
推
06/28 12:02, , 13F
12 plasmid system的效果比較好
06/28 12:02, 13F
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