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[求救] 配細胞培養液的正確方法?

看板Biotech (生命科學)作者 (高進®)時間13年前 (2011/08/23 22:59), 編輯推噓32(32推 0噓 32→)
留言64則, 32人參與, 最新討論串1/1
是這樣的 因為我們不是生科相關科系 但是因為需要做到細胞測試 所以要配細胞培養液 想不到兩個帶我的學長在配法上竟完全不同 學長A: 配置前在血清瓶內裝滿1 L的去離子水 再進滅菌釜滅菌 滅完之後 將無菌水放入無菌操作台照射紫外光 同時也將配置細胞培養液需要的碳酸氫鈉粉末稱量好拿進去照射紫外光 最後將罐裝細胞培養基粉末放入 之後 一起將藥品加入無菌水 整瓶血清瓶拿起來搖晃使之溶解 過無菌濾膜 分裝完成 學長B: 直接在室外拿1 L燒杯裝入950 mL去離子水 再將碳酸氫鈉和細胞培養基粉末加入 以磁石攪拌 再加50 mL去離子水沖洗罐裝內殘餘粉末後倒入燒杯 接著直接將燒杯拿進無菌操作台 過濾膜濾至已滅菌之大血清瓶 最後再將大血清瓶內之培養液分裝至小瓶 學長A說學長B那種作法不行 很容易污染 學長B卻說學長A那種作法麻煩不必要 濃度也不會正確 也說他這樣配都沒污染過 因為是新生 不曉得哪個學長說的是正確的 也不知道要跟著哪個做法 想請問大家指導 拜託了 感謝! -- 我是賭神高進 不是雜碎高義 高義，你個仆街仔。 高義，你他媽雜碎。 溝一，哩機咧糙淑辣。 館一，雅沒給某種。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.38.3.170
推
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B
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推
08/23 23:07, , 2F
如果有過膜的話 我覺得b也是可行的 雖然我是用a的方法
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推
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我們都是照學長B那樣配 養到現在沒有汙染!
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推
08/23 23:12, , 4F
B 過膜也可以把菌給過濾掉(黴漿菌好像不行)
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推
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B是對的
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08/23 23:14, , 6F
我覺得你可以從culture的書籍開始看 學長姊教有時會有錯誤
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黴漿菌好像要用.1的Filter (sales說的)
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08/23 23:14, , 8F
觀念
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推
08/23 23:17, , 9F
附帶一提:照UV是沒有辦法殺菌的,你可以請學長A爬爬文,看一
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08/23 23:18, , 10F
下無菌操作台的原理~
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推
08/23 23:23, , 11F
推birdddd 實驗方法 儀器操作 從前輩那裡學來之後最好再
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推
08/23 23:23, , 12F
B
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08/23 23:24, , 13F
找找文獻書籍和儀器說明書 前人傳下的方法有時會多或少
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其中某些步驟 有時會造成自己很大困擾
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B，A的作法有點多此一舉，照紫外燈的意義為何?!
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推
08/23 23:33, , 16F
B A拿粉末去照光的時候 難道會去翻動嘛?不然怎麼確定殺菌
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08/23 23:33, , 17F
夠不夠徹底,有沒有每一個死角都照到
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08/24 00:49, , 18F
UV怎麼會不能殺菌? 只是操作台不是利用UV達到無菌吧
08/24 00:49, 18F
推
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A幹麼一直照UV...水已經滅菌過已經無菌最後過濾膜就好了
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粉末照uv的意義到底在哪...
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推
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一般過.22的濾膜 但不保證黴漿菌
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A的濃度這樣配也不正確 應該是加入粉末後定量至1L
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你隨便找個藥品 上面寫的一定是這樣 add to 1L
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推
08/24 01:15, , 24F
看到A的配法一直猛搖頭..到底在幹麼 有點像在裝忙
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不是步驟多就是小心 就不會污染 生物實驗室都用B的方法
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你之後如果是從A那邊聽來 關於非本科的知識 最好小心
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08/24 01:18, , 27F
很可能是他自己的理解 而不是常用的作法
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推
08/24 01:27, , 28F
B
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推
08/24 02:53, , 29F
UV穿透力這麼弱 照UV到底有什麼用?? A的配法完全是自以為是
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08/24 02:55, , 30F
而已 重點是過膜過程別污染就好 另外你們的培養基不用加血
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08/24 02:57, , 31F
清嗎? 若需要加10%血清 那培養基的體積應是0.9L而非1L
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08/24 02:59, , 32F
UV絕對可以殺菌 但UV穿透力極弱 若有測過Hood UV強度的人
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就會知道把senser放在燈管旁跟操作台上這樣短短地距離
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08/24 03:02, , 34F
UV強度可以差到快10倍 根本沒殺菌力可言
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推
08/24 03:33, , 35F
A學長用搖晃...真不專業 兩者也沒調pH的動作?
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推
08/24 03:35, , 36F
至少我呆的兩個lab都有調啦 現在的還會調滲透壓...
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推
08/24 10:16, , 37F
我的配法大致跟B很類似,但我有調整pH值跟加FBS,另外過濾可
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08/24 10:17, , 38F
以把徾漿菌以外的菌濾除,a的方法有點太多餘反而會增加汙染
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推
08/24 10:17, , 39F
我的意思是操作台的UV無法達到實際殺菌效果
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推
08/24 10:21, , 40F
機率,倘若擔心黴漿菌汙染,可以用0.1um濾膜過濾或加入抗生
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素(如biomyc-1 ~3)稀釋加入培養基
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操坐檯的uv確實無法達到完整殺菌效果,重點是使用前的清潔
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08/24 10:25, , 43F
使用物品的殺菌,操作手法,以前我很少開uv 也都沒甚麼汙染
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推
08/24 10:32, , 44F
B才對~A一整個錯超大,濃度錯又浪費時間
08/24 10:32, 44F
推
08/24 10:34, , 45F
B才是對的。 UV根本照不透玻璃，所以A的手法做一堆白工
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A的做法真的有必要的也只有第一步的將去離子水滅菌
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08/24 10:40, , 47F
A好怪 = = 都不調pH的喔..
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如果會怕...加anti
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豬養殖研究中心好像有資料? 或是ATCC的
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推
08/24 19:01, , 50F
照UV可能是想殺死瓶子外面的細菌吧..我猜
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→
08/24 19:02, , 51F
調pH都經經驗法則，兩公升培養液加多少5N鹽酸，也是很愉快
08/24 19:02, 51F
推
08/24 21:55, , 52F
B +1 過filter後 就是無菌狀態!!
08/24 21:55, 52F
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08/25 00:39, , 53F
B
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推
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B+1~之前實驗室是這樣做的
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推
08/25 00:52, , 55F
B是對的 A的濃度錯了（整個在裝忙）
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08/25 06:22, , 56F
其實UV真的不能"殺"菌, 只能抑制細菌生長~~~~~
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08/25 13:08, , 57F
B 照紫外光是沒效的.....又浪費時間
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推
08/26 01:33, , 58F
B A根本是不董原理裝懂
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08/26 12:33, , 59F
B
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08/29 19:18, , 60F
B，但ddH2O有先滅過菌
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推
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b
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推
09/07 18:45, , 62F
跟A學長說: 你錯了!
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B
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B
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